වෛරස් න්යෂ්ටික අම්ල හඳුනාගැනීම

බොහෝ වෛරස් වල ජානමය අනුපිළිවෙල දැනගෙන ඇත.අනුපූරක වෛරස් DNA හෝ RNA කොටස් සමඟ දෙමුහුන් කිරීම සඳහා නිර්මාණය කර ඇති DNA හි කෙටි කොටස් වන න්යෂ්ටික අම්ල පරීක්ෂණ.පොලිමරේස් දාම ප්‍රතික්‍රියාව (PCR) වෛරස් හඳුනාගැනීම සඳහා වඩාත් කාර්යක්ෂම තාක්‍ෂණයකි.ඉහළ ප්‍රතිදාන රෝග විනිශ්චය ක්‍රම මෑතකදී සංවර්ධනය කර ඇත.

A. න්යෂ්ටික අම්ල දෙමුහුන් තාක්ෂණය

ප්‍රධාන වශයෙන් සදර්න් බ්ලොටින් (දකුණු) සහ උතුරු බ්ලොටින් (උතුරු) ඇතුළුව න්‍යෂ්ටික අම්ල දෙමුහුන්කරණය වෛරස් රෝග විනිශ්චය ක්ෂේත්‍රයේ වේගයෙන් වර්ධනය වන නව තාක්‍ෂණයකි.දෙමුහුන් කිරීමේ තක්සේරුවේ තාර්කිකත්වය වන්නේ අනුපූරක වෛරස් DNA හෝ RNA කොටස් සමඟ දෙමුහුන් කිරීම සඳහා නිර්මාණය කර ඇති DNA ("පරීක්ෂණ" ලෙස හඳුන්වන) කෙටි කොටස් භාවිතා කිරීමයි.උනුසුම් කිරීම හෝ ක්ෂාරීය ප්‍රතිකාරය මගින් ද්විත්ව කෙඳි සහිත ඉලක්කගත DNA හෝ RNA තනි කෙඳිවලට වෙන් කර පසුව ඝන ආධාරකයක් මත නිශ්චල වේ.ඊට පසු, පරීක්ෂණයක් එකතු කර ඉලක්කගත DNA හෝ RNA සමඟ දෙමුහුන් කරනු ලැබේ.පරීක්ෂණය සමස්ථානික හෝ විකිරණශීලී නොවන නියුක්ලයිඩ් සමඟ ලේබල් කර ඇති බැවින්, ඉලක්කගත DNA හෝ RNA ස්වයං විකිරණවේදය හරහා හෝ biotin-avidin පද්ධතිය මගින් අනාවරණය කර ගත හැක.බොහෝ වෛරස් ජෙනෝම ක්ලෝන කර අනුක්‍රමණය කර ඇති බැවින්, ඒවා නිදර්ශකයේ පරීක්ෂණ ලෙස වෛරස් විශේෂිත අනුපිළිවෙල භාවිතා කර අනාවරණය කර ගත හැක.දැනට, දෙමුහුන් කිරීමේ ක්‍රමවලට ඇතුළත් වන්නේ: තිත් බ්ලොට්, සෛල තුළ ස්ථානීය දෙමුහුන්කරණය, DNA බ්ලොටින් (ඩීඑන්ඒ) (දකුණු බ්ලොට්) සහ ආර්එන්ඒ බ්ලොටින් (ආර්එන්ඒ) (උතුරු බ්ලට්).

B.PCR තාක්ෂණය

මෑත වසරවලදී, සංවේදී නොවන හෝ වගා කළ නොහැකි වෛරස් පරීක්ෂා කිරීම සඳහා PCR මත පදනම්ව in vitro nucleic acid විස්තාරණ ශිල්පීය ක්‍රම මාලාවක් සංවර්ධනය කර ඇත.PCR යනු vitro polymerase ප්‍රතික්‍රියාව මගින් නිශ්චිත DNA අනුක්‍රමය සංස්ලේෂණය කළ හැකි ක්‍රමයකි.PCR ක්‍රියාවලියට පියවර තුනකින් යුත් තාප චක්‍රයක් ඇතුළත් වේ: denaturation , annealing , and extension ඉහළ උෂ්ණත්වයකදී (93℃~95℃), ද්විත්ව නූල් DNA තනි DNA නූල් දෙකකට වෙන් කරනු ලැබේ;පසුව අඩු උෂ්ණත්වයකදී (37℃~60℃), අනුපූරක DNA කොටස් වලට සංශ්ලේෂණය කරන ලද නියුක්ලියෝටයිඩ ප්‍රයිමර් දෙකක්;Taq එන්සයිම (72℃) සඳහා සුදුසු උෂ්ණත්වයකදී, නව DNA දාමවල සංශ්ලේෂණය ප්‍රාථමික 3'අන්තයේ සිට අනුපූරක DNA සැකිලි ලෙස සහ තනි නියුක්ලියෝටයිඩ ද්‍රව්‍ය ලෙස භාවිතා කරමින් ආරම්භ වේ.එබැවින් සෑම චක්රයකටම පසුව, එක් DNA දාමයක් දම්වැල් දෙකකට විස්තාරණය කළ හැකිය.මෙම ක්‍රියාවලිය පුනරාවර්තනය කරමින්, එක් චක්‍රයක සංස්ලේෂණය කරන ලද සෑම DNA දාමයක්ම ඊළඟ චක්‍රයේ අච්චුවක් ලෙස භාවිතා කළ හැකි අතර, එක් එක් චක්‍රය තුළ DNA දාම සංඛ්‍යාව දෙගුණ වේ, එනම් PCR නිෂ්පාදනය 2n ලඝු වේගයකින් විස්තාරණය වේ.චක්‍ර 25 ත් 30 ත් අතර ප්‍රමාණයකට පසුව, විද්‍යුත් විච්ඡේදනය මගින් PCR නිෂ්පාදනය හඳුනාගනු ලබන අතර, UV ආලෝකය (254nm) යටතේ නිශ්චිත DNA නිෂ්පාදන නිරීක්ෂණය කළ හැක.නිශ්චිතභාවය, සංවේදීතාව සහ පහසුව සඳහා එහි වාසිය සඳහා, HCV, HIV, CMV, සහ HPV වැනි බොහෝ වෛරස් ආසාදනවල සායනික රෝග විනිශ්චය සඳහා PCR භාවිතා කර ඇත.PCR ඉතා සංවේදී බැවින් එය fg මට්ටමේ වෛරස් DNA හඳුනා ගත හැකි බැවින්, ව්‍යාජ ධනාත්මක බව වැළැක්වීම සඳහා මෙහෙයුම ඉතා ප්‍රවේශමෙන් සිදු කළ යුතුය.ඊට අමතරව, න්‍යෂ්ටික අම්ල පරීක්ෂණයේ ධනාත්මක ප්‍රතිඵලය සාම්පලයේ සජීවී බෝවන වෛරසයක් ඇති බව අදහස් නොවේ.

PCR තාක්ෂණය පුළුල් ලෙස යෙදීමත් සමඟ විවිධ පරීක්ෂණ අරමුණු සඳහා PCR තාක්ෂණය මත පදනම්ව නව ශිල්පීය ක්‍රම සහ ක්‍රම සංවර්ධනය කෙරේ.උදාහරණයක් ලෙස, තත්‍ය කාලීන ප්‍රමාණාත්මක PCR මගින් වෛරස් බර හඳුනාගත හැක;පටක හෝ සෛල තුළ වෛරස් ආසාදනය හඳුනා ගැනීම සඳහා ස්ථානගත PCR භාවිතා කරයි;කැදලි PCR මගින් PCR හි විශේෂත්වය වැඩි කළ හැක.ඒවා අතර තත්‍ය කාලීන ප්‍රමාණාත්මක PCR වඩාත් වේගයෙන් සංවර්ධනය කර ඇත.TaqMan ජල විච්ඡේදක පරීක්ෂණය, දෙමුහුන් පරීක්ෂණ සහ අණුක බීකන් පරීක්ෂණය වැනි බොහෝ නව තාක්ෂණික ක්‍රම, සායනික පර්යේෂණවල බහුලව භාවිතා වන තත්‍ය කාලීන ප්‍රමාණාත්මක PCR තාක්ෂණයට ඒකාබද්ධ කර ඇත.රෝගීන්ගේ ශරීර තරලයේ වෛරස් බර නිවැරදිව හඳුනා ගැනීමට අමතරව, මෙම ක්‍රමය මත්ද්‍රව්‍යවලට ඔරොත්තු දෙන විකෘති හඳුනා ගැනීමට ද භාවිතා කළ හැකිය.එබැවින්, තත්‍ය කාලීන ප්‍රමාණාත්මක PCR ප්‍රධාන වශයෙන් රෝග නිවාරණ බලපෑම් ඇගයීම සහ ඖෂධ ඉවසීමේ නිරීක්ෂණ සඳහා යොදනු ලැබේ.

C. වෛරස් න්යෂ්ටික අම්ලවල අධි-නිලලනය හඳුනා ගැනීම

අලුතින් මතුවන බෝවන රෝග ඉක්මනින් හඳුනාගැනීමේ අවශ්‍යතා සපුරාලීම සඳහා, DNA චිප්ස් (DNA) වැනි විවිධ අධි-නිර්මාණ හඳුනාගැනීමේ ක්‍රම ස්ථාපිත කර ඇත.DNA චිප් සඳහා, නියැදිය සමඟ දෙමුහුන් කළ හැකි DNA පරීක්ෂණ ක්ෂුද්‍ර අරා (DNA) සෑදීම සඳහා විශේෂිත පරීක්ෂණ සංශ්ලේෂණය කර ඉතා ඉහළ ඝනත්වයකින් කුඩා සිලිකන් චිප්වලට සම්බන්ධ කර ඇත.දෙමුහුන් කිරීමේ සංඥාව confocal අන්වීක්ෂය හෝ ලේසර් ස්කෑනරය මගින් රූපගත කළ හැකි අතර පරිගණකය මගින් තවදුරටත් සැකසිය හැකි අතර විවිධ ජාන සම්බන්ධයෙන් විශාල දත්ත කට්ටලයක් ලබා ගත හැක.DNA චිප වර්ග දෙකක් තිබේ."සංශ්ලේෂණ චිපය" පහත පරිදි වේ: විශේෂිත ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ සෘජුවම චිප්ස් මත සංස්ලේෂණය කර ඇත.තවත් එකක් DNA සංචිත චිපයකි.ක්ලෝන කරන ලද ජාන හෝ PCR නිෂ්පාදන විනිවිදකයේ පිළිවෙලට මුද්‍රණය කර ඇත.DNA චිප් තාක්ෂණයේ වාසිය නම් DNA අනුපිළිවෙලවල් විශාල ප්‍රමාණයක් එකවර හඳුනාගැනීමයි.රෝග කාරක හඳුනාගැනීමේ චිපයේ නවතම අනුවාදයට එකවර මිනිස් වෛරස් 1700 කට වඩා හඳුනාගත හැකිය.DNA චිප් තාක්ෂණය සම්ප්‍රදායික න්‍යෂ්ටික අම්ල දෙමුහුම් ක්‍රමවල ගැටලු විසඳා ඇති අතර වෛරස් රෝග විනිශ්චය සහ වසංගත රෝග අධ්‍යයනය සඳහා ඉතා පුළුල් යෙදුම් ඇත.